Állatorvos szekció

A lovak idiopathicus conjunctivalis pseudotumora, vagy chronicus nodularis lymphocytás conjunctivitise, többnyire unilaterlisan előforduló, ismeretlen eredetű, makroszkóposan daganatszerű, gyulladásos jellegű kötőhártya elváltozása. Vizsgálataink során célul tűztük ki, az anti-Ki-67 és anti-PCNA antitestek, proliferatiós markerek segítségével meghatározni a lovak conjunctivális pseudotumorának replikativ aktivitását.

Tizenkét lóból származó műtéti bioptátumot vontunk be kutatásunkba. A pufferolt, 8 %-os formaldehid-oldatban, szobahőmérsékleten 24 órán át konzervált, mintákat a Kórbonctani és Igazságügyi Állatorvostani Tanszéken dolgoztuk fel. A műtétileg eltávolított, standard körülmények között konzervált szövetmintát szövetelőkészítő automatával tettük alkalmassá a további feldolgozásra. A paraffinos blokkokból 3-4 μm vastagságú metszeteket készítettünk, amelyek közül egy-egy példányt első lépésben haematoxilinnal és eosinnal festettünk meg. A metszeteket NIKON Optiphot-2 típusú fénymikroszkóp segítségével tanulmányoztuk, 40x-, 100x-, 200x- és 400x-os nagyításokon, ill. NIKON Coolpix 4500 típusú digitális kamerával felvételeket készítettünk.

Az immunhisztokémiai vizsgálatokhoz, a szilanizált tárgylemezekből készített metszeteket kétszer váltottxylolban, majd háromszor váltott alkoholban deparaffináltuk, majd 1x-es PBS-sel való mosás után antigénfeltárást végeztünk. Az antigének feltárása magas hőmérsékleten, mikrohullámmal történt, kiegészítve Target Retrieval Solution feltáró oldattal. Az endogén-peroxidáz aktivitását 0,3%-os H2O2-dal, metanolban blokkoltuk 5 percig. Az antigén feltárást követően a metszeteket Ventana típusú automata immunfestőgépbe helyeztük. Az immunhisztokémiai vizsgálatok során használt ellenanyagok a következők voltak: anti-Ki-67 és anti-PCNA . Az immunhisztokémiai reakciókat avidin-biotin immunperoxidáz rendszerrel és DAB kromogénnel tettük láthatóvá. A kontrasztfestés Mayer-féle haemalunnal történt.

Az anti-Ki-67 nem mutatott immunreaktivitást a lovakból származó mintákon. Az anti-Ki-67 klón [BGX-297] és az anti-PCNA immunpozitív mintákat produkáltak. A PCNA magasabb proleratiós index %-ot mutatott a pozitív immunreaktivitást mutató Ki-67-el szemben.

Az eredmények azt mutatják, hogy a formaldehid-oldatban fixált, paraffinba ágyazott, ló szöveti mintákon, így a conjunctivalis pseudotumorban, a PCNA, érzékenyebb marker a replikatív frakció meghatározása szempontjából, mint a Ki-67.