Szekciók

A Mycoplasma synoviae világszerte elterjedt kórokozó, amely fertőző synovitist, légzsák-gyulladást, és tojáshéj-deformitást okozhat a baromfi- és pulykaállományokban. A hőérzékeny (thermosensitive, ts+) MS-H vakcinát széles körben használják az ellene való védekezésben. A telepek mentesítési programjában alapvető fontosságú, hogy az állatokból kimutatott baktériumokról gyorsan és könnyen meg lehessen állapítani, hogy a vakcina vagy a vad típusba tartoznak. Emellett szükséges lehet a ts- és ts+ törzsek kimutatása is, mivel a vakcina törzs elvesztheti a hőérzékenységét in vivo passzálás során. Az eddigi eljárások, amelyeket erre az elkülönítésre alkalmaztak, nem mindig tették lehetővé a gyors és pontos elkülönítést, ráadásul némelyik speciális laborfelszerelést is igényelt.

A mi kutatásunk arra irányult, hogy egy hatékony, a rutin diagnosztikában is használható módszert fejlesszünk ki az obg gén már ismert két pontmutációjának használatával a vad- és vakcina törzsek, illetve a ts+ és ts- vakcina törzsek elkülönítésére.

Kétféle, a pontmutációk azonosítására alkalmas MAMA (mismatch amplification mutation assay) módszert dolgoztunk ki, melyek során a kórokozó kitenyésztésére nincs szükség. A valós idejű polimeráz láncreakcióval (real-time polimerase chain reaction, PCR) egybekötött, primerek olvadási hőmérsékletén alapuló, ún. melt-MAMA rendszerben két, az adott pontmutációra specifikus primer versenyez egymással. A versenyző primerek közül az egyik méretét egy 14-15 bázispárból álló GC-farokkal megnöveltük, így az olvadási hőmérsékletek jobban elkülönülnek az eredmények leolvasásakor. A másik rendszer egy hagyományos PCR-rel elvégezhető, agaróz gél alapú MAMA, ahol a törzseket gélelektroforézis során a PCR termékek mérete alapján tudjuk elkülöníteni. A módszereket a referens M. synoviae törzs (NCTC 10124), a ts+ MS-H vakcina törzs (Vaxsafe MS-H) és két szintetikus kontroll szekvencia (tartalmazták az összes specifikus pontmutációt) segítségével állítottuk be. Az eljárásokat klinikai mintákon is teszteltük.

A módszerek, amelyeket kialakítottunk, elég specifikusak és szenzitívek, hogy a gyakorlatban is használhatóak legyenek. Az eddigi eljárásokkal szemben nem időigényes a végrehajtásuk, az állatokból vett mintákon azonnal elvégezhetőek. A módszerek költséghatékonyak is, mivel nem szükséges hozzájuk speciális laborfelszerelés, sem drága reagensek. Alkalmazásukkal a vad, ts+ és ts- MS-H törzsek elkülöníthetőek, ezáltal a M. synoviae okozta fertőzések terjedése nyomon követhető, ami elősegíti a fertőzések kontrollálását.