Biológus szekció

A hasnyálmirigy egyik leggyakoribb daganatos betegsége, a pancreas duktális adenocarcinoma (PDAC) a tumoros elváltozásokból adódó halálozások közül a vezető halálokok közé tartozik. A PDAC tumorigenezis hátterében leggyakrabban a KRAS és a TP53 gének mutációját mutatták ki, de nagy szerepet játszik a betegség rossz prognózisában, ha a kialakuló mutációk mellé gyulladás is társul. A PDAC esetében a tumor stroma és a tumorsejtek közt zajló kölcsönhatások, melyeket különféle citokinek és növekedési faktorok parakrin módon közvetítenek, befolyásolják a betegség agresszív mivoltát. A stroma legjelentősebb sejtes összetevői a fibroblasztok, melyek több populációt alkotnak: myofibroblaszt (αSMA expresszáló) vagy gyulladásos (citokin szekréció) fenotípust mutathatnak. A tumor mikrokörnyezetben zajló sejtközti kommunikáció egy formája az extracelluláris vezikulák (EV) kibocsátása és felvétele; az EV-k biológiailag fontos molekulákat védett, membránnal körülvett módon tudnak szállítani.

Célom volt PDAC eredetű organoidok és stroma sejtkultúrák 1.) megfelelő markerekkel történő jellemzése; 2.) citokin/növekedési faktor és receptoraik expressziójának, valamint 3.) EV kibocsátásának mérése, továbbá 4.) a stroma sejtkultúrák aktiváltságának leírása, végül pedig 5.) az organoidok és stromasejtek KRAS onkogén és TP53 tumorszupresszor gén hotspot mutációinak meghatározása.

Dolgozatom során a szakirodalomban elfogadott markerekkel jellemeztem az organoid, illetve stroma sejtkultúrákat. További RT-qPCR-es vizsgálataim kimutatták számos citokin/növekedési faktor és receptoraik eltérő mértékű expresszióját a stromasejtekben és organoidokban. Kimutattam, hogy a PDAC eredetű kultúrák jellemzően a CD63 exoszóma markerre pozitív EV-ket bocsátanak ki. Érdekes módon a stromasejtek EV kibocsátása magasabb az organoidokénál. Mindemellett a stromasejtek jellemzése során megfigyeltem, hogy hosszabb tenyésztés során megváltozik az aktivált fibroblasztokra jellemző markerek expressziója és az EV kibocsátás mennyisége.

Ezen eredmények jól mutatják, hogy az organoid technológiával készült PDAC eredetű tenyészetek, valamint a stromasejtek EV-ket bocsátanak ki, melyek a sejtkultúrák felülúszójából speciális gyönggyel és áramlási citometriával gyorsan kimutathatók. Továbbá eredményeim rávilágítanak a tumor-stromasejt közti kommunikáció jelentőségére a PDAC tumor mikrokörnyezetében és alátámasztják, hogy az EV-k e kommunikáció aktív résztvevői.

Kutatási támogatások: OTKA-NN-118018, NVKP-16-0007, ICGEB-CRP, Felsőoktatási Intézményi Kiválósági Program