Szekciók

A magzati ivarmeghatározás a hosszú vemhességi idejű unipara emlős fajok ̶ mind a gazdaságilag jelentős, mind pedig a fogságban élő egzotikus állatok ̶ tenyésztésében nagy jelentőséggel bír, azonban a jelenleg elérhető módszerek a releváns fajoknak csak szűk körében kivitelezhetők. A sejtmentes magzati DNS (cffDNS) anyai vérkeringésben való előfordulását az emlős fajok széles körében feltételezve, kutatásunk elsődleges célja volt egy cffDNS-en alapuló univerzális genetikai ivarmeghatározó teszt kidolgozása.

Az Y-kromoszómán lokalizált, hím specifikus gének (SRY, TSPY, Amelogenin), és egy autoszómás, reakció kontrollként használandó gén (GAPDH) erősen konzervatív régióit in silico vizsgálattal azonosítottuk, majd a legtöbb szempontnak megfelelő génszakaszokra univerzális primereket terveztünk. A kiválasztott primerpárokat a releváns fajok széles köréből gyűjtött, ismert ivarú egyedektől származó kontroll mintákon (szőr, ürülék, izom, vér) teszteltük. A vizsgált állatok köre kiterjedt a főemlősökre (pl. gorilla), páros és páratlanujjú patásokra (pl. szarvasmarha, muflon, takin, ló, Grévy-zebra, rinocérosz), ormányosokra (pl. afrikai elefánt) és ragadozókra (pl. oroszlánfóka).

A simplex (egy markeres) PCR programokkal történő primer-tesztelés után a specifikus termékek bázissorrendjét szekvenálással igazoltuk. Ezt követően optimalizáltuk a diplex (két markeres) reakciót is, ún. touch-down technika segítségével. A sokszorosított fragmenseket agarózgél- és kapilláris elektroforézis technikával mutattuk ki.

A kidolgozott protokollal, a várakozásoknak megfelelően, jó minőségű hím eredetű minták esetén mind az Y-kromoszómás és autoszómás, míg nőstény minták esetén kizárólag a GAPDH génszakasz volt kimutatható.

Az érzékenységi és előtesztelési vizsgálatok után az anyai vérből történő magzati ivarmeghatározáshoz ismert ivarú vehemmel rendelkező zebra, ló és szarvasmarha plazmamintáit teszteltük a kutatás jelen fázisáig. További fajok mintáinak tesztelése folyamatban van, mellyel a teszt megbízhatóságát, specificitását és szenzitivitását tervezzük pontosan meghatározni.

Az univerzális teszt létrehozásával a kutatás jelentősen elősegítheti az állatok tenyésztésével kapcsolatos tevékenységeket, különös tekintettel a fogságban élő vadállat fajok konzervációs programjára, s emellett elsőként nyújthat információt a cffDNS anyai vérkeringésben való jelenlétéről számos, korábban nem vizsgált emlős fajban.