Szekciók

A sertések reprodukciós és légzőszervi szindrómája (porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS) egyike a legnagyobb gazdasági kárt okozó megbetegedéseknek, amelyek a mai sertéstartást érintik. A betegséget a Nidovirales rend Arteriviridae családjába tartozó Betaarterivirus suid 1 és 2 fajok (PRRSV 1, 2) okozzák.

A PRRSV által okozott klinikai tünetek eltérőek a különböző korcsoportok tekintetében. A kocák esetében reprodukciós zavarok lépnek fel, az újszülött malacok fertőződésekor pedig csökken a vitalitás, légzőszervi tünetek jelennek meg, amely miatt jelentősen megnő az újszülöttkori mortalitás. A növendék és hízó korcsoportokban súlyos légzőszervi tünetek, illetve tüdőgyulladás jelentkezik. A vírus immunszupresszív tulajdonságú, elsődleges célsejtjei a tüdő alveolaris makrofágjai, továbbá a nyirokszervek hasonló sejtjei. A betegség lefolyása nagymértékben függ az adott vírustörzs virulenciájától, mivel az erőteljesebb patogenitású törzsekkel való fertőzés során súlyosabb elváltozásokat, eltérő TNFα- (tumor-necrosis-factor-α) és interleukin-10- expressziót figyeltek meg a kisebb megbetegítő képességű törzsekhez képest. Célunk egy olyan multiplex fluoreszcens in situ hibridizációs módszer kifejlesztése volt, amelynek segítségével egy metszeten egyszerre vizsgálható a gyulladásos citokinek és a PRRSV szövetbeli kifejeződése. Kutatásunk során két eltérő patogenitású PRRSV-törzzsel fertőzött, majd a fertőzést követően eltérő időpontokban kiírtott malacok thymus-, tracheobronchialis nyirokcsomó- és tüdőmintáit vizsgáltuk. A szövetmintákat formalinban fixáltuk, víztelenítettük, paraffinba ágyaztuk, majd 3 µm-es metszeteket készítettünk belőlük. A deparaffinálást és a sejtfeltárást követően a metszeteken multiplex, fluoreszcens in situ hibridizációs eljárás (RNAscope) segítségével egyszerre azonosítottuk a TNFα és az IL-10 citokineket az mRNS-eikre tervezett komplementer próbákkal. Ezzelegyidejűleg egy harmadik próba által a PRRSV nukleokapszidját kódoló RNS-szakaszát is megjelenítettük. Metszeteinket metszetszkenner (Pannoramic MIDI II, 3D Histech) segítségével digitalizáltuk, majd az alkalmazott fluorofór festékeknek megfelelő, 4-féle hullámhosszon vizsgáltuk. Fluoreszcens jelölést alkalmazó rendszerek esetén, különösen paraffinba ágyazott minták vizsgálata során gyakran jelent gondot a minta autofluoreszcenciája. A felmerült probléma megoldása érdekében vizsgáltuk a különböző autofluoreszcencia-szuppressziós módszereket (hosszabb deparaffinálás, quencher-oldat alkalmazása, photobleaching) és sikerrel optimalizáltuk a kidolgozott RNAscope-módszert az alkalmazott hullámhosszokon.

A kutatásunk során kidolgozott módszer segítségével jobban megérthetjük a PRRS-betegség kórfejlődését, és a vírus okozta immunbiológiai folyamatok jellegét a két eltérő patogenitású törzs esetében. Jelentős eredmény, hogy sikerült optimalizálnunk a multiplex fluoreszcens in situ hibridizációs eljárást az állatorvosi tudományterületen.