Szekciók

A kutyák dirofilariosisa jelentős, szúnyogok által terjesztett, zoonotikus potenciállal rendelkező parazitózis. A megbetegedések kórokozói a Dirofilaria immitis, amely szívférgességet, valamint a Dirofilaria repens, amely elsősorban bőrférgességet okoz. A két faj pontos elkülönítése a kezelés és a megelőzés szempontjából kiemelt jelentőségű. A PCR- és qPCR-vizsgálatok megbízható fajszintű azonosítást tesznek lehetővé, ugyanakkor idő- és eszközigényük korlátozza rendelői és terepi alkalmazásukat. A hurokközvetített izotermikus amplifikáció (LAMP) állandó hőmérsékleten végezhető, ezért alkalmas lehet egyszerűsített molekuláris diagnosztikai eljárások fejlesztésére.

Munkánk során kifejlesztettünk egy direkt, zárt csöves LAMP-módszert, amely diagnosztikai teljesítményét D. immitis és D. repens teljes kutyavérből történő kimutatásában vizsgáltuk, hagyományos DNS-izolálás nélkül. Összesen 60 darab, EDTA-val alvadásgátolt vérmintát vizsgáltunk. NaOH–Chelex® 100-alapú mintaelőkészítést követően fajspecifikus primerkészletekkel végeztük az amplifikációt. Az eredményeket zárt csöves fluoreszcens detektálással, kék fényű megvilágítás mellett értékeltük, és a duplex qPCR eredményeivel összehasonlítottuk.

A duplex qPCR-vizsgálat 23 D. immitis és 12 D. repens monoinfekciót, 14 koinfekciót, valamint 11 mindkét fajra negatív mintát azonosított. A direkt LAMP relatív szenzitivitása a D. immitis esetében 91,89%, a D. repens esetében 84,62% volt. Álpozitív eredményt egyik faj esetében sem tapasztaltunk, így a relatív specificitás mindkét esetben 100%-os volt.

Eredményeink alapján a direkt, zárt csöves LAMP gyors és egyszerűsített módszer lehet D. immitis és D. repens molekuláris kimutatására. A DNS-izolálás elhagyása, az izotermikus amplifikáció és a zárt csöves értékelés csökkenti a vizsgálat idő- és eszközigényét, valamint a keresztszennyeződés kockázatát. További optimalizálást és nagyobb mintaszámon végzett validálást követően a módszer near-Point-of-Care diagnosztikai alkalmazásra is alkalmassá válhat.