Tehéntej kimutatása molekuláris eszközökkel borból
Csősz György IV. évfolyam
SZIE-Állatorvos-tuodmányi Kar, Állattenyésztési, Takarmányozástani és Laborállat-tudományi Intézet, Állattenyésztési és Genetikai Osztály
Témavezető: Dr. Maróti-Agóts Ákos

Absztrakt:

A tejmirigyben történő tejelválasztás során több fiziológiás, illetve pathológiás folyamat eredményeként is kerülhetnek mitokondriumok a tejbe. Fiziológiásan a tejszekréció természetes típusai folytán, patológiásan az emelkedett szomatikus sejttartalom miatt. A mitokondriumok eredetükből és működésükből adódóan tartalmaznak mitokondriális DNS-t. A szarvasmarha mitokondriumokat tartalmazó tehéntej többféle okból lehet a borban. Derítésre, azaz a borban lebegő, vagy oldott anyagok kicsapására és a savak finomítására használható a borok kezelése során, de mint szennyeződés is bekerülhet a borba. Szennyeződésként egy speciális borhamisítási módszer során, amikor hazánkba gyenge minőségű bor a külföldre tejet szállító kamionokban visszáruként érkezik. Az importált bor, szintén nem jó minőségű magyar borral keverve kerül értékesítésre. A tej kimutatása az ilyen módon hamisított borokból felveti a tartálykocsik szabályos, illetve alapos tisztításának kérdését.

Dolgozatunkban arra kerestük a választ, hogy egyszerű, molekuláris módszerekkel (DNS tisztítás, PCR, QPCR) milyen érzékenységgel vagyunk képesek kimutatni a tehéntejet borból. Kísérleteinkben a tehéntejben előforduló szarvasmarha mitokondriális DNS volt a kimutatandó célmolekula. Együttműködve a Nemzeti Élermiszerlánc Biztonsági Hivatal, Borászati és Alkoholos Italok Igazgatóságával, bormintákat kaptunk neves termelőktől származó, tiszta magyar fehérborokból és vörösborokból, és Olaszországból érkező tartálykocsikból.

A DNS tisztítást egyszerű DNS tisztító kittel (Sigma Aldrich, Gen Elute) végeztük.

A DNS hozamokat, koncentrációkat fluorométerrel (Qubit 2.0) határoztuk meg.

További elvárás volt, hogy a minél érzékenyebb kimutathatóság

érdekében rövid szakasz amplifikálása, ennek megfelelő primereket terveztünk a szarvasmarha mitokondriumának CytB szakaszára. Az PCR reakció eredményének érzékenyebb kimutatása érdekében SYBR Green-es reakciókat is kipróbáltunk.

Eredményeink szerint borból még 10000-szeres hígítás esetén is kitisztítható a tej eredetű DNS. Reményeink szerint a kísérletek folytatásával detektálható lesz a szarvasmarha mitokondriális DNS-re jellemző szekvencia is különböző mértékű hígításokban, mind az általunk modellezett laboratóriumi rendszerben, mind a hamisított borokban.

Előadások listája