2016. évi TDK konferencia

Az adenovírusok (Family: Adenoviridae, AdV) közepes méretű, ikozaéder alakú kapsziddal rendelkező, burok nélküli, kozmopolita, dsDNS vírusok. Gazdafajaik között minden gerinces osztály képviselői megtalálhatók. Gazda-specificitásuk általában erős, ugyanakkor egy gazdát akár több AdV típus is fertőzhet. Az AdV-ok és gazdafajaik leszármazását ábrázoló törzsfák topológiája feltűnően hasonló, ami a hosszú távú koevolúció eredménye lehet. Taxonómiai szempontból az Adenoviridae család 5 nemzetséget tartalmaz. A hüllőket fertőző AdV-ok többsége Atadenovirus és feltételezzük e nemzetség pikkelyes hüllő eredetét. Az AdV-os fertőzöttség leggyakrabban tünetmentes, vagy csak enyhe felső légúti és emésztőszervi megbetegedésben nyilvánul meg. Ritkán azonban súlyos kimenetelű is lehet.

TDK munkám hüllőktől származó minták PCR-es szűrésére, valamint a kimutatott AdV-ok minél teljesebb genetikai jellemzésére irányult.

Mintáimat magyarországi eredetű, elhullott és élő állatokból származó belső szervek illetve bélsár képezték. A DNS feltárást követő szűrővizsgálatokhoz az AdV-ok DNS-függő DNS-polimeráz génjének mintegy 320 bp méretű szakaszára irányuló konszenzus, nested PCR-t alkalmaztam. A genom feltérképezéséhez néhány, általunk választott gén (IVa2, III, pVII, hexon, 100K) adott szakaszainak felerősítését kíséreltem meg a laborban már meglévő, illetve általam tervezett nemzetség-specifikus primerekkel. Ezek közül a IVa2, a pVII, a hexon és a 100K adott pozitív eredményt. Az így kapott genomiális „szigeteket” specifikus primerek és egykörös PCR-ek alkalmazásával összekötöttem, majd a nukleotid sorrendet primerséta használatával határoztam meg.

Az eddig szűrt 55 minta közül 15-nél kaptam pozitív eredményt, melyek közül 12-ben korábban már leírt szekvenciát mutattam ki. Egy zöld és egy barna anoliszból származó minta tartalmazott új AdV-t, amelyek közül a zöld anoliszból kimutatott vírus genetikai elemzését végeztem. A genom IVa2 és hexon gén közötti régiójában három különböző méretű szakaszt sikerült felerősítenem, melyek együttes mérete 14771 bp, G+C-tartalma kiegyensúlyozott (51,48%). A génbanki homológia keresés eredménye alapján a DNS-polimeráz szekvenciája legközelebbi rokonságban (57% azonosság, 72% hasonlóság aminosav szinten) a Lizard 2 AdV megfelelő szakaszával állt. A polimeráz és a hexon gének aminosav szekvenciája alapján készült törzsfa-rekonstrukciók és a maximum likelihood módszerrel készült filogenetikai elemzés szintén megerősítették az anolisz AdV Atadenovirus nemzetségbe tartozását.

Eredményeink alapján úgy gondoljuk, hogy a vizsgált AdV nem gazdaváltás következtében került az állatba, hanem jelenléte hosszú távú koevolúció eredménye, azaz „valódi” anolisz AdV-t vizsgáltam.