2017. évi TDK konferencia

Az intenzív baromfitartás során többek között a magas környezeti hőmérséklet által kifejtett hőstressz jelenti az egyik fő stresszfaktort, ami negatívan befolyásolhatja az állatok jóllétét és a termelésélettani paramétereket. Hőstressz hatására fokozódik a prooxidáns- (főként a H2O2-) termelés, ez nagymértékben hozzájárul a stresszválasz káros hatásainak kialakulásához, azonban a képződő hősokkfehérjék elősegíthetik az anyagcsere gyors és hatékony adaptációját a megváltozott környezeti viszonyokhoz. A hőstresszre adott válasz kialakításában a májnak központi szerepet tulajdonítunk, ugyanakkor a máj különféle sejttípusainak e folyamatokban betöltött feladata nem pontosan tisztázott, így munkánk során e tényezők vizsgálatával foglalkoztunk.

A hőstressz sejtszintű hatásainak vizsgálatára csirke eredetű májsejt-Kupffer-sejt ko-kultúrán végeztünk in vitro kísérleteket. A kísérlethez szükséges máj- és Kupffer-sejteket 20 napos, Ross 308 típusú brojlercsirkék májából izoláltuk, többlépcsős perfúzió, kollagenázzal történő emésztés és differenciáló centrifugálás segítségével. Az egyes sejttípusok szerepének vizsgálatára hepatocyta mono-kultúrákat és 6:1 (hepatocyta:Kupffer-sejt) sejtarányú ko-kultúrákat alakítottunk ki. A 24 óra alatt konfluenssé vált tenyészeteket a hőstressz modellezésére 44°C-on inkubáltuk 1, valamint 2 óráig, míg a kontroll sejteket folyamatosan 37°C-on tenyésztettük. A sejtek életképességét a hőkezelést követően, illetve 20 óra múlva MTS és CCK-8 reagenssel határoztuk meg, továbbá Amplex Red teszt segítségével vizsgáltuk a hőstressz hatására termelt H2O2 mennyiségét.

A tenyésztett sejtek életképessége hőstressz hatására mindegyik sejtmodellen szignifikánsan csökkent közvetlenül a hőkezelés alkalmazását követően. 20 óra múlva kimutatható tartós, jelentős életképesség-csökkenést csak a hosszabb idejű hőkezelésen átesett tenyészeteken mutattunk ki. A 2 órás hőkezelés hatására szignifikánsan emelkedett a tenyésztett sejtek H2O2-termelése mindkét sejtmodellen. A H2O2-termelés számottevően nagyobb mértékűnek bizonyult a ko-kultúrán, mint a májsejt mono-kultúra esetében.

Eredményeink megerősítik, hogy a hőstressz nagymértékben károsítja a máj sejtjeinek életképességét csirkében. A tenyésztett sejtek hőkezelés hatására megnövekedett H2O2-termelése arra utal, hogy a prooxidánsok, reaktív vegyületek májbeli termelődésének fokozódása fontos szerepet tölt be a stresszválaszra jellemző fokozott oxidatív stressz kialakulásában. A kísérlet alapján kimondható, hogy a Kupffer-sejteknek meghatározó szerepük van a stresszorok hatására bekövetkező prooxidáns-termelésben.