2020. évi TDK konferencia

A gabona és a gabona alapú élelmiszerek potenciális mikotoxin szennyezettsége jelentős veszélyt hordoz magában. A táplálkozással bevitt, a Fusarium fajok által termelt, trichotecén vázas deoxinivalenol (DON) és T-2 toxin változatos megjelenésű és időtartamú betegségeket okozhat, így a jelentős gazdasági károkon túl súlyos egészségügyi kockázatot jelent. A DON és T-2 toxin együttesen is előfordulhatnak a fertőzött növényekben, ezért kombinációjuk hatásának feltérképezése gyakorlati jelentőségű bélhámsejt modelleken.

A kutatás során humán, nem-daganatos vékonybélhám sejtvonalon, a HIEC-6 sejteken vizsgáltuk a DON-t és a T-2 toxint önmagában és kombinációban alkalmazva. A sejtek életképességét MTS módszerrel, az extracelluláris hidrogén-peroxid (H2O2) szintet Amplex Red technikával, az intracelluláris redox állapotot DCFH-DA próbával, az IL-6 és IL-8 gyulladásos citokinek koncentrációját szendvics ELISA-módszerrel valamint a klaudin-1 és az okkludin lokalizációját immunfluoreszcens festéssel, konfokális mikroszkóppal határoztuk meg.

24 órás kísérleti eredményeink szerint DON esetében 5 µmol/L, T-2 toxin esetében 10 nmol/L és DT2 kombinációs kezeléseknél 5 µmol/L DON + 10 nmol/L T-2 koncentrációknál szignifikáns sejthalált figyeltünk meg. 24 órával a kezelés után az 1 µmol/L DON és az 5 nmol/L T-2 kezelés, illetve a 1 µmol/L DON + 5 nmol/L T-2 kombinációs DT2 kezelés szignifikánsan emelte meg az extracelluláris H2O2 termelést és az intracelluláris oxidatív stresszt a kontroll értékekhez képest. A kezelések mindegyike szignifikánsan növelte az IL-6 és IL-8 szinteket mikotoxin terhelést nem kapott sejtek alap IL-6 és IL-8 termeléséhez képest. A mikotoxin expozíció csökkentette a klaudin-1 fehérje expresszióját, míg az okkludin fehérje expressziója változatlan maradt.

Összefoglalva, kutatási munkánkban elsőként vizsgáltuk HIEC-6 sejtvonalon a DON és a T-2 sejtéletképességre gyakorolt hatásait a mikotoxinokat külön-külön és kombinációban adva, 24 órás inkubációs időt alkalmazva. Megállapítottuk, hogy a HIEC-6 sejtvonal alkalmas vizsgálati modell az élelmiszerekben előforduló mikotoxin szennyeződések gyulladáskeltő és oxidatív stresszt előidéző tulajdonságainak meghatározásában. Az eredményeink alapján megállapítható, hogy a nem-citotoxikus koncentrációban adott mikotoxin kezelések növelték az extra- és intracelluláris oxidatív stresszt, illetve a gyulladásos IL-6 és IL-8 citokinek termelődését. A DON és a T-2 külön-külön, illetve kombinációban alkalmazva is szignifikánsan csökkentette a TJ fehérjék közül a klaudin-1 expresszióját, míg az okkludin koncentrációja nem változott szignifikáns mértékben a mikotoxin expozíciót követően.