Szekciók

A Mycoplasma gallisepticum világszerte elterjedt fakultatív patogén kórokozó, mely pulykában és csirkében légúti megbetegedést és szaporodásbiológiai zavarokat okoz. A fertőzött állatok takarmányfelvétele, súlygyarapodása, tojástermelése és a tojás keltethetősége is csökken. A baktérium gazdasági kártétele kimagasló, a védekezés elengedhetetlen. Legcélravezetőbb megoldás az állományok kórokozótól való mentesítése és a mentesség fenntartása, ez azonban számos állattartó telepen nem kivitelezhető. A fertőzés megelőzésére vakcinák, kezelésére különböző antimikrobiális szerek alkalmazhatóak.

Az elmúlt évtizedekben kifejlesztett M. gallisepticum vakcinatörzsek közül az F, ts-11, 6/85, illetve az újonnan kereskedelmi forgalomba került K törzs bizonyult hatékonynak. Az egyes vakcinatörzsek egymástól, illetve vad törzsektől való elkülönítése a diagnosztikában, valamint a vakcinázási programok eredményességének ellenőrzésében is kulcsfontosságú. A különböző elkülönítő eljárások közül napjainkban a molekuláris biológiai módszerek alkalmazása terjedt el. Az F, ts-11 és 6/85 vakcinatörzsek gyors és pontos azonosítását PCR (polimerase chain reaction) alapú MAMA (mismatch amplification mutation assay) módszerek teszik lehetővé.

Munkánk során a K törzs (K 5831, Vaxxinova BV., Hollandia) elkülönítésére szolgáló MAMA rendszer fejlesztését tűztük ki célul. Teljes genom szekvenálást követően összehasonlítottuk a K törzs és más online elérhető M. gallisepticum törzs génszekvenciáit. A vakcina-specifikus mutációk felderítése számítógépes analízis segítségével történt. Végül négy vakcinatörzs-specifikus pontmutáció bizonyult alkalmasnak a további vizsgálatokhoz. A teszteket 274 mintán végeztük el, köztük a világ különböző országaiból származó klinikai mintákból és vad izolátumokból származó DNS-mintákon.

Az eredmények alapján az a pontmutáció bizonyult a legmegfelelőbbnek, mely a K törzs fruA génjében a 88. nukleotidon eredményez guanin-adenozin szubsztitúciót, így aszparaginsav-aszparagin aminosav-cserét okoz a kódolt fehérjében. A tervezett MAMA rendszerben a vakcina-specifikus primer 14 bázispárnyi GC-farokkal jelölt, amely méretkülönbség kiválóan detektálható hagyományos (agarose-MAMA) és valós idejű (melt-MAMA) PCR segítségével egyaránt, az olvadáspontokban mért 4,91°C különbség miatt.

Az általunk tervezett, megfelelő specificitású és érzékenységű, rutin diagnosztikában alkalmazható eljárás lehetővé teszi a K törzs elkülönítését más M. gallisepticum törzsektől, mely nagy előrelépés a diagnosztikában és a vakcinázási programok hatékonyságának ellenőrzésében.