Szekciók

A nyugat-nílusi vírus az Orthoflavivirus nemzetség tagja, amely világszerte előforduló neurotróp kórokozó. Az emberek és lovak a kórokozó alkalmi gazdái, a fertőzések kb. 80%-a tünetmentes formában zajlik. Azonban, amennyiben a vírus a központi idegrendszerbe jut, változó súlyosságú idegrendszeri tünetek alakulhatnak ki, amelyet összefoglalóan nyugat-nílusi vírus okozta neuroinvazív betegségnek (WNND) neveznek. Humán tanulmányok és állatkísérleti modellek egyaránt alátámasztják a sejtes immunválasz szerepét nyugat-nílusi és egyéb orthoflavivírus fertőzések esetén a klinikai kórkép manifesztációjában, illetve a kórokozók elleni védelemben. Emellett újabb tanulmányok rámutattak, hogy az orthoflavivírusok elleni sejtes immunválasz detektálása diagnosztikai szempontból is releváns lehet.

Jelen tanulmány célja a nyugat-nílusi vírus fertőzött lovakban a kórokozó-specifikus sejtes immunválasz detektálása ló interferon-gamma ELISpot módszerrel. Ezen túlmenően, a sejtes és a humorális immunválasz közötti összefüggés feltárása.

Kutatásunkba tizennégy igazolt nyugat-nílusi vírus fertőzött ló került bevonásra, amelyek az akut fázis során idegrendszeri tüneteket mutattak. A PBMC minták WNV kapszid fehérje-oldattal kerültek stimulálásra, majd 24 óra elteltével ló IFN ELISpot teszten kerültek vizsgálatra, amelynek eredményei pont-formáló egység (SFU) kerültek kifejezésre. Az ELISpot eredmények objektív értékelésére a distribution-free resampling módszer került alkalmazásra. A szérummintákból WNV IgG ELISA, illetve WNV-re és a másik két endémiás orthoflavivírusra irányuló vírus neutralizációs próba (VNT) került elvégzésre.

A vérminták a WNV fertőzés felállítását követően átlagosan 290 +/- 62,5 nappal kerültek levételre. Kettő PBMC minta kizárásra került a sejtek nem megfelelő életképessége következtében. A fennmaradó 12 mintából tíz esetben tapasztaltunk szignifikáns IFN választ. A klinikai tünetek és az ELISpot válasz mértéke között nem volt szignifikáns összefüggés. Szintén nem volt korreláció igazolható az ELISpot válasz mértéke és a lovak életkora, fajtája, és ivara között. Az összes egyed pozitívnak bizonyult WNV IgG ELISA-n, a WNV titerek 1:64 és 1:1024 között voltak. Nem volt szignifikáns összefüggés az ELISpot válasz és a WNV titerek között.

Eredményeink alapján a ló IFN ELISpot teszt alkalmasnak bizonyul a WNV-specifikus interferon-gamma termelés detektálására klinikai tünetekben megnyilvánuló fertőzésen átesett lovak WNV kapszid fehérjével stimulált mintáin, az infekciót követő 1 éven belül. A módszernek a jövőben szerepe lehet az orthoflavivírusok differenciáldiagnosztikájában endémiás területeken. Az interferon-gamma termelés mértékének és a WNV-specifikus ellenanyagszintek közötti korreláció hiánya a kórokozó-specifikus memória T-sejt válasz potenciális szerepére hívja fel a figyelmet. Kutatásunk fő limitációi az alacsony mintaelemszám, illetve az IFN-termelő sejtek fenotipizálásának hiánya.