Szekciók

A vizsgálat célja egy megbízható, LAMP-alapú ivarmeghatározási módszer fejlesztési folyamatának teljeskörű bemutatása volt házi galambok számára. A molekuláris genetikai alapú ivarmeghatározás jelentősége abban rejlik, hogy morfológiai bélyegek alapján sok esetben nem lehetséges az ivarok pontos elkülönítése. A projekt során a Chan és mtsai (2012) által közölt cikkből származó PCR- és LAMP-primereket teszteltünk, azonban ezek nem bizonyultak működőképesnek. A Columba livia domestica referencia genomra történő visszaellenőrzés és javítás után sem sikerült kielégítő eredményt elérni, ezért tíz saját primer szettet terveztünk. Kettő adott értékelhető eredményt, majd több primer szett kombinált használata tovább javította a hatékonyságot, de a kívánt specificitást egyelőre nem sikerült még elérni. A WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix kit betain hozzáadásával kiegészített alkalmazása során az ALT_V2 primer szett bizonyult a legeredményesebbnek 65 °C-on, 50 perces reakcióidő mellett, de a primerek további finomítása és a reakciókörülmények optimalizálása szükséges. A mintavételi eljárások összehasonlításakor három tamponos módszert próbáltunk ki, melyek DNS-tartalomban nem mutattak különbséget, de gyakorlati használhatóságban eltérések jelentkeztek: a fülpiszkáló pálca vattájának levágása nehézkesnek bizonyult, míg a szarvasmarhákra tervezett swab túl nagynak. A molekuláris ivarmeghatározás piaci környezetének értékelése során a nemzetközi PCR-alapú szolgáltatások ára jellemzően bruttó 4.000-11.000 Ft/minta volt, míg a saját, laborban kivitelezett LAMP-eljárás reálisan elérhető és szolgáltatásként ajánlható bruttó árát 2.390-2.950 Ft/minta értékben határoztam meg, ami, különösen nagyobb mintaszám esetén tovább csökkenthető. A gyakorlati alkalmazhatóság bevezethetőség szemléltetésére összeállítottunk egy „One-page” telepi SOP protokollt is, amely mintaként szolgálhat a primer optimalizáció befejezése után véglegesített eljárás alapvető eszközökkel történő kivitelezésére lehetővé teszi a mintavételtől és a reakció beállításon át a kiértékelésig laboron kívüli környezetben.

Összességében a LAMP technológia és a nem invazív mintavételi módszerek kombinálása ígéretes lehetőséget kínál a galambok ivarmeghatározására. Bár a rendszer jelenleg még nem éri el a rutinszerű alkalmazáshoz szükséges specificitást, a gazdasági előnyök és a telepi protokoll által igazolt gyakorlati használhatóság alátámasztják a további fejlesztés szükségességét, és megerősítik, hogy a LAMP a jövőben gyors, költséghatékony és megbízható alternatívává válhat a galambtenyésztők számára a tenyészállat jelöltek ivar meghatározásában.