Szekciók

A Dirofilaria immitis (szívféreg, D. immitis) egy vektorok által terjesztett parazita, amely világszerte egyre növekvő kockázatot jelent mind a házi-, mind a vadon élő kutyafélék számára, és amelynek terjedéséhez a klímaváltozás is hozzájárul. A gyors és megbízható diagnosztika létfontosságú a megelőzés és az ellenőrzés szempontjából, különösen az állatorvosi gyakorlatban, ahol nagyszabású tesztelésre van szükség. Számos módszer áll rendelkezésre, beleértve a vizuális vizsgálatokat (például kenetek vagy módosított Knott-teszt), a szerológiai eljárásokat (mint az ELISA), valamint a molekuláris technikákat, például a PCR-t és a valós idejű PCR-t. Mindegyik technikának megvannak az előnyei, ugyanakkor az érzékenység, a specificitás, a költségigény, illetve a technikai követelmények tekintetében bizonyos fokú korlátokkal is rendelkeznek.

Célunk egy új, hurok által közvetített izotermális amplifikáción (LAMP) alapuló eljárás kidolgozása volt a D. immitis kimutatására kutyák vérmintáiból izolált DNS-ből (n = 40). Öt LAMP primerszettet terveztünk a citokróm-oxidáz alegység I (COI) génjére, majd párhuzamosan teszteltük azok teljesítményét a valós idejű PCR-technika alkalmazásával, amely eredményei referencia standardként szolgáltak az érzékenység és specificitás vonatkozásában. Két primerszett (1-es és 44-es) magas érzékenységet és specificitást mutatott, egyetlen fals negatív eredményt adva. Másik két primerszett (15-ös és 32-es) gyengén teljesített, több fals negatív eredményt produkálva, míg a 2-es szett mutatta a legjobb érzékenységet, de csökkent specificitással, feltehetően a Dirofilaria repens (bőrféreg) keresztreakciója miatt.

Összességében eredményeink azt mutatják, hogy a megfelelő érzékenységgel és specificitással bíró LAMP-alapú genetikai tesztelés eléréséhez a különböző primerszettek kiterjedt előzetes szűrővizsgálata szükséges, amelyek eredményeként egy gyors és költséghatékony tesztet lehet létrehozni. Ez a módszer megfelelő alternatívát kínálhat a szívféreg kimutatására, és képes lehet megkülönböztetni egymáshoz közeli parazitafajokat. További fejlesztésekkel, különösen a DNS-kivonás egyszerűsítése és egy hasonló kimutatási eljárás kidolgozása a D. repens számára, egy optimalizált és validált LAMP-vizsgálat nagy lehetőséget rejt magában, mint helyszíni diagnosztikai eszköz, amely támogatja a dirofilariasis nagyléptékű felügyeletét és ellenőrzését a változó járványtani mintázatok közepette.