Szekciók

A szarvasfélék (Cervidae) agancsa egyedülállóan gyorsan növekvő, évente megújuló csontszövet, amely kiváló forrása lehet a genetikai vizsgálatoknak. Az agancsból kinyert DNS nemcsak populációgenetikai és természetvédelmi kutatásokban hasznos, hanem igazságügyi vizsgálatokban is értékes bizonyíték lehet. Az eddig leírt kinyerési módszerek közül egyesek azonban speciális laborfelszereltséget, vagy hosszú időt igényelnek, mások nem tartalmazzák a szükséges információkat a reprodukálhatóság vagy a kinyert DNS mennyiségére és tisztaságára vonatkozóan, illetve korlátokkal rendelkezhetnek a felhasznált mintatípus és a célzott genomszakasz tekintetében. Kutatásunk célja ezért egy olyan módosított protokoll kidolgozása volt, amely egyszerűbb és gyorsabb, ugyanakkor megbízhatóan biztosít megfelelő mennyiségű és minőségű DNS-t széleskörű genetikai vizsgálatokhoz.

Őz, gím- és dámszarvas egyedek összesen 30 darab agancsmintáját vizsgáltuk, (fajonként 10-10 db) melyekből a felületi tisztítás után alacsony fordulatszámú fúrással vizsgálati mintát biztosítottunk. Az agancsminták mechanikus roncsolása után négy órás emésztés és dekalcifikálás, majd szerves oldószerrel (fenol–kloroform–izoamil-alkohol) történő tisztítás és végül ultracentrifugálás révén történő bekoncentrálás következett. A kivont DNS mennyiségét és minőségét agaróz gélelektroforézissel, Qubit fluorometriával és Nanodrop spektrofotometriával ellenőriztük. Az eddig leírt technikákhoz képest több pontban is módosított módszerünk használhatóságának igazolására fajspecifikus, nukleáris mikroszatellitákat sokszorosító multiplex PCR vizsgálatokat végeztünk.

A vizsgált paraméterek alapján a három szarvasféle mintáinak eredmények között nem mutatkozott jelentős különbség. A kinyert genetikai anyag integritásának, koncentrációjának és tisztaságának felmérésére irányuló vizsgálatok igazolták, hogy a minták döntő többsége megfelelő mennyiségű és minőségű DNS-t adott a további vizsgálatokhoz. Ugyanakkor a szuboptimális mennyiségi, vagy tisztasági értékekkel rendelkező minták PCR vizsgálata is teljes genetikai profilt eredményezett, ami alátámasztja a kidolgozott protokoll alkalmazhatóságát, akár sejtmagi vizsgálatokra is.

Az eredmények alapján a kidolgozott eljárás kis mennyiségű és erősen mineralizált mintából is megbízhatóan biztosít megfelelő mennyiségű és minőségű DNS-t további genetikai vizsgálatokhoz is. A protokoll bár fokozott körültekintéssel kezelendő (egészségre ártalmas) vegyszert (fenol) tartalmaz, a hagyományosan csontmalmot és folyékony nitrogént igénylő módszerekkel egyenértékű hozamot és tisztaságot biztosít egyszerűbb és költséghatékony módon. További tesztelésekhez szeretnénk a vizsgálatokba más kalcifikált mintatípusokat (pl. koponya trófeák), illetve más szarvasfajok különböző korú agancsmintáit is bevonni.