Kutya zsírszöveti eredetű őssejtek izolálása, karakterizálása, in vitro tenyésztése és differenciáltatása - előzetes eredmények
Dulka Bettina V. évfolyam
SzIE, Állatorvos-tudományi Kar, Szülészeti és Szaporodásbiológiai Tanszék és Klinika, OSSKI
Témavezetők: Dr. Thuróczy Julianna, Dr. Balogh Lajos, Kovács-Haász Veronika

Absztrakt:

A multipotens tulajdonságokkal rendelkező mezenchimális őssejtek (MSC) valamennyi szervben megtalálhatóak, osztódásra, valamint zsír-, porc-, és csont-irányú differenciálódásra egyaránt képes, mezodermális eredetű sejtek. MSC-t számos differenciált szövettípusból izoláltak már: csontvelőből, zsírszövetből, és köldökzsinór Wharton kocsonyájából. Mivel a zsírszövet könnyen hozzáférhető, rendszerint nagy mennyiségben áll rendelkezésre, a humán és állatorvosi regeneratív orvoslás, illetve a szöveti helyreállító műtétek (pl. csont-, porcpótlás) egyik alternatív őssejt forrása lehet.

Céljaink között szerepelt kutyák zsíreredetű őssejt izolálásának, karakterizálásának, in vitro tenyésztésének és differenciálódásának módszertani kidolgozása és a lehetséges klinikai célú felhasználás bemutatása. Vizsgálataink során különböző korú Beagle kutyák in vitro osztódási és differenciálódási képességeit is összehasonlítottuk.

Beagle kutyák mellkasi bőr alatti régiójából steril műtéti beavatkozással gyűjtöttünk, alkalmanként 5-20 grammnyi zsírszövetet. A zsírszöveti mintákat feldaraboltuk, kollagenáz enzimes emésztés után centrifugáltuk, majd a vegyes sejtüledéket tenyésztő flaskákba helyeztük, és tápfolyadékban tenyésztettük. Amikor a letapadt, növekvő sejtek egységes fibroblaszt-szerű képet mutattak fénymikroszkópos vizsgálattal, a tápfolyadékot (10% borjúsavóval kiegészített DMEM táptalaj) csont-, és porc indukciós tápfolyadékokra cseréltük és ebben a közegben folytattuk a tenyésztést. A differenciálódás megkezdésekor, 1 és 3 héttel később ellenőriztük az oszteogenezist alizarin vörös festéssel (kálcium rögök kimutatása) és 5-bromo-4-kloro-3’-indolil-foszfát / kék nitro-tetrazolium reagenssel (alkalikus foszfatáz enzim aktivitás kimutatása). A porcosodás kimutatására dimetil-metilénkék festéket használtunk ugyanilyen időközökben.

A fiatal kutyákból származó őssejtek fokozott növekedési és differenciálódási tulajdonságokat mutattak az idősebb kutyákból nyert mintákhoz képest. Meggyőződésünk szerint a kutya zsírszöveti sejtekből előállított, in vitro differenciálódott vagy multipotens őssejtként in vitro tenyésztett sejtek, alkalmasak állatorvosi klinikai kipróbálásra. Módszerünk megfelelő modell lehet humán őssejt kutatások számára.

Előadások listája