2019. évi TDK konferencia

A deoxinivalenol (DON), amelyet a Fusarium gombafajok termelnek, patológiás elváltozásokat indukálhat, úgy mint a bél barrier károsítása. Befolyásolják a bélhám integritását a sejt morfológia és növekedés megváltoztatásával. A kvercetin (Que) egy polifenolos vegyület, amelynek rákellenes, gyulladásgátlü és antioxidáns hatása van.

A kutatás célja annak meghatározása volt, hogy a nem daganatos eredetű sertés bélhám sejtvonal (IPEC-J2) hogyan reagál a DON kezelésre, valamint annak kiderítése, hogy a Que alkalmas-e védő hatást kifejteni a DON indukálta sejt károsodásra. Ezért vizsgáltuk a DON és Que hatását a sejtek életképességére, a sejt membrán integritásra és sejtek oxidatív állapotára.

A sejtek életképességét MTS módszerrel vizsgáltuk, több koncentrációjú DON és Que koncentrációval. Két kísérleti elrendezést alkalmaztunk, 1) együtt kezelés DON-nal és Que-nel 1 óráig (1 h DON + Que), 2) a sejtek 24 órás Que előkezelést kaptak, amelyet 1 órás DON kezelés követett (24 h Que + 1 h DON). A sejtréteg integritásra kifejtett hatásokat transzepiteliális elektromos ellenállással (TER) és fluoreszcensen jelölt, 4 kDa méretű molakula (FD-4) átjutással mértük. A sejtek oxidatív állapotában történt változásokat két módszerrel vizsgáltuk: 1) az extracelluláris hidrogén peroxide (H2O2) koncentrációját Amplex Red módszerrel, 2) az intracelluláris reaktív oxigén gyökök (ROS) mennyiségét pedig DCFH-DA segítségével határoztuk meg.

Az MTS vizsgálat után a 2 µM DON és 20 µM Que lett kiválasztva a további vizsgálatokhoz. DON-nal kezelve a sejteket a TER értékek szignifikánsan csökkentek, míg Que-nel kezelt sejteknél szignifikánsan nőttek. 1 h DON + Que kezelést kapott sejtek közötti integritás szignifikánsan alacsonyabb volt, míg a 24 h Que + 1 h DON kezelésnél, az 1 h DON inkubáció után szignifikánsan csökkent a TER. A 25 óráig tartó 2 µM DON kezelés önmagában szignifikánsan megemelte az FD-4 átjutását a bazolaterrális térbe, míg a 20 µM Que kezelés nem okozott változást a kontroll értékeivel összehasonlítva. 1 h DON + Que kezelés hatására szignifikánsan megnőtt az FD-4 koncentráció, míg a 24 h Que + 1 h DON nem okozott változást a kontroll értékekhez képest a bazolaterális térben. A DON szignifikánsan megemelte, míg a Que nem változtatta meg a H2O2 koncentrációját az extracelluláris térben. 1 h DON + Que szignifikánsan megnövelte, 24 h Que + 1 h DON kezelés nem okozott változást a H2O2 termelésben az IPEC-J2 sejteknél. 2 µM DON szignifikánsan növelte, a 20 µM Que nem változtatta meg a az intracelluláris ROS mennyiségét, 1 h DON + Que és 24 h Que + 1 h DON kezelések szignifikánsan megemelték a sejten belül mérhető oxidatív stresszt.

A kísérlet alapján a citotoxikus koncentrációban alkalmazott DON megbontja a membrán barrier integritását és oxidatív stresszt general. A Que segíti az egyrétegű sejthám megerősödését, azonban sem a Que együtt sem az előkezelés nem volt alkalmas a DON indukálta toxikus hatások kivédésére.