2009. évi TDK konferencia

Tejelő tehenek bendőjében az ellést követően, a laktáció kezdetén a nagy mennyiségű, könnyen erjedő szénhidrátot tartalmazó abraktakarmány etetése miatt jelentős mennyiségben termelődnek illó zsírsavak (VFA), és gyakran kialakul a bendőacidózis szubakut formája (SARA = subacute ruminal acidosis). Ennek során a bendő pH-ja naponta több órán keresztül 5,5-5,6 alá esik, mely kedvez az acidofil Gram-pozitiv baktériumoknak, ami további fokozott VFA termelődéshez vezet. A bendő pH-csökkenése következtében a Gram-negatív, cellulóz- bontó baktériumok nagy számban pusztulnak el, szétesnek és sejtfalukból lipopoliszacharidok (LPS) szabadulnak fel. Az LPS típusú endotoxinok hatására feltételezésünk szerint a bendő-hámban különféle gyulladásos citokinek, így interleukinok (IL) termelődése indulhat meg.

Annak érdekében, hogy a LPS szerepét a SARA tüneteinek kialakulásában tisztázzuk, három merino juhból bendőhámsejt tenyészetet készítettünk a munkacsoport korábban leírt módszere szerint.

A bendőhámsejteket frakcionált tripszinezéssel izoláltuk. Az első két kísérletben azokat a frakciókat használtuk, melyek főleg a stratum spinosum és basale sejtjeit tartalmazták. Az első kísérletben izolált bendőhámsejteket Medium-199 tápfolyadékban reszuszpendáltunk, majd a tápfolyadékot 50-10-5-1-0 µg/ml LPS-sel (Escherichia coli O55:B5) egészítettük ki, és a sejteket ebben a tápfolyadékban 4 órán keresztül, illetve 10µg/ml LPS-sel kiegészítve 24 órán keresztül, 37°C-on inkubáltuk. Az interleukin-6 (IL-6) koncentrációt ELISA módszerrel határoztuk meg. A 4 és 24 órás stimulálást követően enyhe, nem szignifikáns IL-6 emelkedést mértünk. A második kísérletben az izolált bendőhám-sejteket MEM Hanks’ tápfolyadékban (15 vagy 5% FBS=magzati borjú savó), kollagén I-gyel bevont műanyag tenyésztőedényben tenyésztettük 21 napig, majd stimuláltuk 10 µg/ml LPS-sel 18 órán keresztül 37°C-on. Az FBS-t a stimuláció előtt 8 órával minden esetben elvontuk. Eredményeink szerint a sejtfehérjére számított IL-6 szekréció 183.9±19.4 pg/mg protein (kontroll: 0.01pg/mg) értéket mutatott. A harmadik kisérletben bendőnyálkahártya tenyészetet készítettünk tripszinnel kezelt papillákból. A bendőnyálkahártyából származó, főként kötőszöveti sejteket 14 napig tenyésztettük kollagén nélkül, MEM-Hanks’ tápfolyadékban, a stimuláció előtt 8 órával FBS megvonással. Nem tapasztaltunk IL-6 koncentráció emelkedést a 18 órán keresztüli 10 µg/ml LPS stimulációt követően.

Eredményeink alapján feltételezzük, hogy a bendőnyálkahártya egyes sejtjei - főként a hámsejtek - gyulladásos mediátorokat termelnek, így IL-6-ot, mely a SARA egyes gyulladásos reakcióinak közvetítője lehet.